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食品中霉菌检测常见问题

时间:2019-09-19 04:43:53 栏目:养生

霉菌:

不是分类学上的名词,而是一些丝状真菌的通称,属真菌的一部门;其对人类具有双重性,有利的方面是它能够用来酿造、工业发酵、抗生素和酶制剂的生产等,晦气方面是它能引起农副产物、食品、原料及器材的腐臭,也传染并引起人类和动、植物的多种疾病,少数种类,如黄曲霉,能发生黄曲霉毒素,黄曲霉毒素是一种致癌物质,风险人、畜的健康和生命。是以,霉菌的检测对于食品的平安性很主要。

食品中常见的霉菌:毛霉属、根霉属、曲霉属、青霉属等。

检测中的注重事项:

1、 取样的代表性。

(1)因为霉菌易被携带,所以,检样时把持人员应尽量避免自身携带的或者。

(2)样品的均质及充裕振摇。因为有些孢子是连成串的,故均质和振摇能使其充裕散开,同时,在各梯度一连稀释时,也要用灭菌吸管频频吹吸几回,使孢子充裕散开。

4、培育温度和时间。培育温度 25-28℃培育,5 天后视察。

霉菌磨练中常用的培育基:孟加拉红琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂、察氏琼脂、高盐察氏琼脂等。

5、检样中常见的问题。

(1) 分歧稀释度计数究竟不沟通;

(2) 不生长或生长很好连成片无法计数;

原因:①稀释时未经频频振摇,吹吸,导致孢子未充裕散开,影响了计数的究竟。

②因为培育基不适宜,PH 值低等,致使生长较慢。

③视察时间的把握。真菌生长较慢,故需 5d 后才能视察出究竟。

微生物把持中常见问题的商议与剖析

1、 划线获得单个菌落的方式。划不出单个菌落的原因:

(1) 平板上有过多的水分;

(2) 划线时接种环未经频频灼烧;

(3) 多区划线,三区或四区划线。

涂布利于视察,但因为涂布棒上会带有少量的菌液,或者影响计数的正确性;倾泻更为正确,但晦气于视察菌落的状况。

Beuchat和Matsuda等人离别对这两种方式作了大量对照试验后发现,对霉菌计数来说,涂抹法有以下几方面优胜于倾泻法:①培育出的霉菌菌落数较多;②培育所需的时间较短;③霉菌孢子、菌落形态特征发育完全,便于判定。这是因为绝大多数霉菌是好氧的,在培育基外观生长快,发育好,而混在培育基中发育就受影响,并且在培育基倾泻时霉菌孢子易受热伤害。

培育基的选择应凭据实验材料和磨练目的来确定。今朝国标方式中使用的培育基有:马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)、孟加拉培育基(RBC)、高盐察氏培育基(CAO),个中PDA和RBC适合于一样的霉菌和酵母菌生长,而CAO则适合于高渗性霉菌生长,酵母菌几乎不长。

在平常检测中我们发现,有些常见的耐高渗性霉菌,如局限曲霉、谢瓦曲霉、赤曲霉、Wallemia等在PDA、RBC上生长非常迟缓或不长,而这些菌在高渗培育基如M40Y、DG18(M40Y琼脂配方:蔗糖400g,麦芽提取汁20g,酵母提取汁5g,琼脂20g,氯霉素50mg,蒸馏水1000ml;DG18琼脂配方:葡萄糖10g,卵白胨5g,KH2PO41g,MgSO4·7H2O 0.5g,氯霉素0.1g,0.2%二氯硝基苯胺1.0mL,琼脂15g,蒸馏水1000mL,PH6.5)上则正常生长。孢子、形态特征发育精巧,并且酵母菌也能在M40Y、DG18上生长,是以,若能同时采用PDA和M40Y(或DG18)星散培育各类样品中的霉菌,将能更周全地反映出污染霉菌的菌相。稀奇是对干燥食品、高糖食品、淹渍食品等,更有需要同时采用M40Y或DG18。

因为霉菌中好多种类不会发生有毒的霉菌毒素,风险较小,而有的菌株即使污染数量不多,但其发生的霉菌毒素却风险较大,是以仅作霉菌计数并不克周全反映其风险水平,主要的是要知道污染菌的菌相,才能更好地判断被污染食品的平安水平。

为此,国外有些研究者设计出各类选择性培育基,能够识别产毒的霉菌。如AFPA培育基(配方:酵母提取汁20g,卵白胨10g,柠檬酸铁铵0.5g,0.2%二氯硝基苯胺1.0mL,琼脂15g,蒸馏水1000mL,PH5.6)用于星散黄曲霉毒素发生菌高污染率的食品。产黄曲霉毒素的菌株黄曲霉和寄生曲霉在AFPA上30℃培育2~3天就形成后头有亮橙黄色的特征性菌落,非常轻易识别。有人行使该培育基星散黄曲霉高污染食品花生、玉米等,取得了写意的究竟。是以,针对分歧样品,有目的地设计出响应的选择性培育基,以筛选污染菌中的危险菌群,将是一个值得索求的偏向。

4、 培育基配制时应注重的问题:

(1)灭菌温度要严厉掌握,按照要求灭菌,尤其含糖量较高的培育基温度不该太高,过高会导致糖分焦化,影响质量;

(2)琼脂培育基不克频频熔解。频频熔解会损坏培育基中的营养成分;

(3)培育基不克频频灭菌,频频灭菌也会导致营养成分的损坏;

(4)含琼脂的培育基灭菌后,要摇匀。

5、 平板的留存:

大多数平板如 VRBA、DC、尿素酶生化管、显色系列等要避光低温留存。

6、 产物的留存:

(1) 干粉培育基:避光干燥,结块后不克使用。

(2) 亚碲酸钾卵黄增菌液、50%卵黄乳液等:冷冻留存,使用时,要常温解冻,避免水浴加热。

(3) 抗生素类:冷藏留存,温渡过高会导致活络度的下降。

(4) 兔血浆:冷藏留存少量的红色不会影响究竟。

7、 视察时间的把握:

按 SN、GB 等尺度或培育基的使用解说所述时间进行视察,时间过短或时间过长,单菌落的特征都不会很显着。如单增李斯特氏菌显色培育基,时间短单菌落看不到卵磷脂环,时间长绵羊李氏菌也会发生沉淀环。OXA、PALCAM的视察也如斯,时间过长,李氏菌使整个平板成黑色,晦气于视察单个菌落。

8、 添加剂的添加:

(1)温度的把握。卵黄和抗生素类添加的温度都不该太高。

(2)定量。过多会按捺一些方针菌,太少又导致杂菌的过度生长。

8、 培育温度的把握:

(1)真菌类。25-28℃培育

(2)细菌类。李氏菌在增菌和生化中要求培育温度在 30℃摆布。

(3)其他一样在 36℃摆布。

9、 接种方式:

常用的方式首要有划线、三点接种、穿刺接种、倾泻接种、涂布接种、液体接种。

10、革兰氏染色方式:

染色时间的把握、冲刷的方式。

11、生化实验:

(1)接种的方式

(2)氧化型和发酵型实验把持

(3)阳性菌种的对照

(4)接种前的纯化。挑取单个菌落进行一系列的生化。

霉菌菌落由孢子和菌丝构成,相当扩散,在直径9cm的平皿里,菌落数稍多就互相交叉重叠,影响计数,但数量太少又会发生较大的误差,是以选择适当的稀释度计数是包管究竟正确的要害环节之一。

我们对这方面作了一些视察研究,首先是将实验菌株的斜面培育物制成含有约106个/ml的孢子悬液,并用血球计数器在显微镜下正确计数,然后将孢子悬液作10-1~10-6倍稀释,吸取分歧稀释度的稀释液接种于PDA,25℃培育5天后计数。30种常见霉菌的两种分歧计数方式所得究竟对照显露,大部门菌株每平板含有10~50个菌落的稀释度时的计数与显微镜计数究竟最接近;有近一半的菌株,每个平板含50~100个菌落已较难计数,而大部门菌株,跨越100个/平皿或小于10个/平皿的计数究竟就与显微计数究竟存在较大不同,是以,应尽量选择10~50个/平皿的稀释度进行霉菌计数。

而对上述说起的菌丝很雄厚、菌落稀奇扩散的毛霉、根霉、犁头霉等菌株,则应在更少的局限内计数(30个/平皿以内)。为掌握霉菌的生长速度和菌落的生长局限,可在培育基中添加少量抗生素,如氯霉素(50~100mg/L),金霉素(20~100mg/L),庆大霉素(50mg/L),土霉素(100mg/L)等。

(1)按捺:是在亚按捺剂量因子感化下导致微生物生长住手,但在移去这些因子后生长仍能够恢复的生物学现象。

(2)灭亡:在致死剂量因子的感化下或在亚致死剂量因子长时间的感化下,导致微生物生长能力弗成逆损失,即使移去这种因子后生长仍不克恢复的生物学现象。

(3)防腐:在某些化学物质或物理因子感化下,能防止或按捺微生物生长的一种办法,它能防止食物靡烂或防止食物霉变。

(4)消毒:行使某种方式杀死或灭活物质或物体中所有病原微生物的一种办法,它能够起到防止传染和流传的感化。

(5)灭菌:行使某种方式杀死物体中包罗芽孢在内的所有病原微生物的一种办法。

起原:食品工业科技

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